Секвенирование ДНК

Секвенирование ДНК

Секвенирование биополимеров (белков и нуклеиновых кислот — ДНК и РНК) — определение их первичной аминокислотной или нуклеотидной последовательности (от англ. sequence — последовательность). В результате получается линейное символьное описание, которое сжато резюмирует атомную структуру молекулы.

Для секвенирования применяются методы Эдмана, Сенгера и другие; в настоящее время для секвенирования нуклеиновых кислот обычно применяется метод Сенгера с дидезоксинуклеозидтрифосфатами (ddNTP). Обычно до начала секвенирования производт амплификацию участка ДНК, последовательность которого требуется определить при помощи ПЦР.

Секвенирование по Сенгеру

Дезоксинуклеотидный метод, или метод «обрыва цепи», был разработан Ф. Сенгером в 1977 году и в настоящее время широко используется для определения нуклеотидной последовательности ДНК. При дидезокси-секвенировании происходит гибридизация синтетического олигонуклеотида длиной 17—20 звеньев со специфическим участком одной из цепей секвенируемого участка. Этот олигонуклеотид является праймером, поставляющим 3'-гидроксильную группу для инициации синтеза цепи, комплементарной матрице.

Раствор с праймером распределяют по четырем пробиркам, в каждой из которых находятся четыре дезоксинуклеотида, dATP, dCTP, dGTP и dTTP (один из них — меченный радиоактивным изотопом) и один из четырех 2',3'-дидезоксинуклеотидов (ddATP, ddTTP, ddGTP или ddCTP). Дидезоксинуклеотид включается по всем позициям в смеси растущих цепей, и после его присоединения рост цепи сразу останавливается. В результате этого в каждой из четырех пробирок при участии ДНК-полимеразы образуется уникальный набор олигонуклеотидов разной длины, включающих праймерную последовательность. Далее в пробирки добавляют формамид для расхождения цепей и проводят электрофорез в полиакриламидном геле на четырех дорожках. Проводят радиоавтографию, которая позволяет «прочесть» нуклеотидную последовательность секвенируемого сегмента ДНК.

В более современном варианте дидезоксинуклеотиды метят четырьмя разными флуоресцентными красителями и проводят ПЦР в одной пробирке. Затем во время электрофореза в полиакриламидном геле луч лазера в определенном месте геля возбуждает флуоресценцию красителей, и детектор определяет, какой нуклеотид в настоящий момент мигрирует через гель. Современные приборы используют для секвенирования ДНК капиллярный электрофорез.


См. также



Wikimedia Foundation. 2010.

Игры ⚽ Поможем написать реферат

Полезное


Смотреть что такое "Секвенирование ДНК" в других словарях:

  • секвенирование ДНК — См. Gene sequencing (расшифровка последовательности ДНК). [Англо русский глоссарий основных терминов по вакцинологии и иммунизации. Всемирная организация здравоохранения, 2009 г.] Тематики вакцинология, иммунизация EN DNA sequencinggene… …   Справочник технического переводчика

  • секвенирование ДНК — DNR sekos nustatymas statusas T sritis augalininkystė apibrėžtis Metodas, kuriuo nustatomas azotinių bazių išsidėstymas (seka) DNR molekulėje. atitikmenys: angl. DNA sequencing rus. секвенирование ДНК ryšiai: sinonimas – DNR sekvenavimas …   Žemės ūkio augalų selekcijos ir sėklininkystės terminų žodynas

  • Секвенирование — биополимеров (белков и нуклеиновых кислот  ДНК и РНК)  определение их аминокислотной или нуклеотидной последовательности (от лат. sequentum  последовательность). В результате секвенирования получают формальное описание… …   Википедия

  • Секвенирование линейной амплифицированной ДНК — * секвеніраванне лінейнай ампліфікаванай ДНК * linear amplification DNA sequencing техника секвенирования нативной двунитчатой ДНК после ее амплификации методом ПЦР. Очищенную ДНК и меченый по 51 концу секвенирующий прймер смешивают с четырьмя… …   Генетика. Энциклопедический словарь

  • Секвенирование по Сэнгеру (ферментативный метод) — * секвеніраванне па Сэнгеру (ферментатыўны метад) * Sanger sequencing (enzymatic method) техника секвенирования (см.) однонитчатой ДНК. В основе метода присоединение (отжиг, см.) к однонитчатой ДНК мишени секвенирующего праймера () или обратного… …   Генетика. Энциклопедический словарь

  • Секвенирование анализ последовательности оснований — Секвенирование, анализ последовательности оснований * секвеніраванне, аналіз паслядоўнасці асноў * sequencing or sequence analysis определение последовательности оснований в ДНК или РНК или аминокислот в белке. С. включает также изучение… …   Генетика. Энциклопедический словарь

  • Секвенирование генома — * секвеніраванне генома * genome sequencing идентификация и порядковая запись всех нуклеотидных пар оснований генома. В н. вр. С. г. проводят современными методами химической деградации ДНК Максама Гилберта () и синтеза ДНК на матрице в… …   Генетика. Энциклопедический словарь

  • Секвенирование методом копирования — * секвеніраванне метадам капіравання * sequencing by copying technique метод определения последовательности оснований, при котором вначале синтезируют цепочку ДНК, комплементарную РНК, а затем определяют ее нуклеотидную последовательность. Далее… …   Генетика. Энциклопедический словарь

  • Секвенирование по Сэнгеру — Метод Сэнгера метод секвенирования (определения первичной последовательности нуклеотидов молекулы нуклеиновых кислот) ДНК и РНК. Метод Сэнгера также известен как метод обрыва цепи. Метод основан на присоединении к однонитчатой секвенируемой… …   Википедия

  • Секвенирование — определение последовательности нуклеотидов в молекуле ДНК или последовательности аминокислот в белке …   Словарь по психогенетике


Поделиться ссылкой на выделенное

Прямая ссылка:
… Нажмите правой клавишей мыши и выберите «Копировать ссылку»